一、实验室整体布局

1. 功能分区与动线设计

• 原则：单向流（人、物、空气）、避免交叉污染、分级洁净控制。

• 典型分区：

  区域	洁净等级	功能	位置要求
  更衣缓冲间	ISO 8级	人员换鞋、更衣、手消毒	入口处，设风淋室
  准备区	ISO 7级	试剂配制、耗材灭菌（高压锅/传递窗）	邻近核心区，负压控制
  核心操作区	ISO 5级	干细胞培养、传代（生物安全柜内操作）	实验室最内侧，正压维持
  细胞储存区	ISO 7级	液氮罐、-80℃冰箱	独立区域，防爆设计
  检测区	ISO 7级	流式细胞仪、PCR等分析设备	与操作区物理分隔
  污物处理区	无洁净要求	废弃物暂存、灭菌	靠近出口，负压排风

• 动线设计：
  人员流：更衣→缓冲→准备区→核心区→退出（不可逆行）
  物品流：清洁物品经传递窗灭菌→准备区→核心区→污物出口

2. 建筑与装修要求

• 墙体/天花板：彩钢板（抗菌、光滑易清洁），接缝处密封处理。

• 地面：环氧树脂自流平（无缝隙、防静电）。

• 门窗：气密门（带自动闭门器），观察窗为双层钢化玻璃。

• 照明：防尘LED灯具，核心区照度≥300 lux。

二、洁净空调系统（HVAC）

1. 关键参数

• 空气过滤：

  • 初效过滤器（G4）+中效过滤器（F8）+高效过滤器（HEPA H14，ISO 5级区域）。

  • 换气次数：ISO 5级≥50次/h，ISO 7级≥20次/h。

• 压差梯度：核心区＞准备区＞缓冲间＞走廊（压差≥10 Pa）。

• 温湿度控制：温度22±2℃，湿度45%~65%（干细胞敏感，需精确调控）。

2. 气流组织

• 核心区：垂直单向流（天花板FFU送风，地面回风）。

• 其他区域：非单向流（上送侧回）。

三、核心设备清单

四、污染控制策略

1. 微生物控制

• 日常消毒：

  • 台面：75%酒精+异丙醇交替使用。

  • 空气：臭氧发生器每周灭菌（夜间自动开启）。

• 检测频率：

  • 每月沉降菌检测（培养皿暴露30分钟）。

  • 每季度高效过滤器检漏（PAO测试）。

2. 交叉污染预防

• 细胞操作：不同细胞系分时段操作，使用独立培养箱。

• 耗材管理：一次性无菌耗材，移液器带滤芯吸头。

五、安全与合规

• 生物安全：符合《实验室生物安全通用要求》（WS 233）。

• 伦理审查：人类干细胞需伦理委员会批准（如涉及iPSC或ESC）。

• 应急措施：

  • 备用电源（保障液氮罐、培养箱供电）。

  • 防污染应急预案（如支原体污染处理流程）。